Набор для выявления антител к вирусуреовирусу птиц

Набор для выявления антител к вирусуреовирусу птиц (РВП) методом иммуноферментным анализом (ИФА)

Общие сведения

В состав набора входят иммуноспецифические и химические компоненты:

— полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированными в лунках инактивированным антигеном: РВП — по 2 микропанели;

— буфер для разведения испытуемых и контрольных проб;

— промывочный буфер;

— стандарт — (сыворотка крови кур с повышенным содержанием специфических антител к антигену РВП);

— положительный контроль (сыворотка крови кур, содержащая специфические антитела к антигену РВП);

— отрицательный контроль (сыворотка крови кур, не содержащая специфических антител к антигену РВП);

— антивидовой конъюгат (антитела к IgG кур, меченые щелочной фосфатазой);

— субстрат;

— стоп-раствор.

Набор рассчитан на анализ 88 испытуемых проб на каждой микропанели. Компоновка набора допускает возможность дробного исполь­зования компонентов для проведения нескольких исследований по мере поступления биологического материала.

Для исследования исполь­зуют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза и бактериальной контаминации объемом 0,3–0,5 см³.

Следует помнить, что ИФА является высоко­чувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с подготовкой образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Перед началом работы микропанели и все компоненты набора выдерживают 20–30 мин при температуре 22-27°С. Не исполь­зованные реагенты убирают в холодильник (2 — 8°С) сразу же после проведения исследования.

Принцип метода

Вирусный антиген, адсорбированный в лунках полистироловой микропанели, связывается со специфическими антителами, присутствующими в сыворотке крови, в результате чего формируется комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (антитела к IgGкур, меченые щелочной фосфатазой), фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат- индикаторного раствора и образование растворимого окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски раствора в лунке микропанели пропорциональна содержанию антител в исследуемом материале.

Порядок применения

Приготовление рабочих растворов

Буфер для разведения проб. Концентрированный раствор буфера разводят в 4 раза дистиллированной или деионизованной водой.

Промывочный буфер. Концентрированный раствор буфера разводят в 20 раз дистиллированной или деионизованной водой.

Коньюгат, субстратный раствор и стоп-раствор — готовы к употреблению.

Подготовка испытуемых сывороток и контрольных проб

Все испытуемые сыворотки, стандарт, положительный и отрицательный контроли разводят в соотношении 1:400 буфером для разведения проб, исполь­зуя для каждого образца новый наконечник.

Постановка реакции

В лунки микропанели в двух повторах вносят по 100 мкл приготовленных контрольных проб: буфер для разведения проб, отрицательный контроль, положительный контроль, стандарт.

В остальные лунки микропанели вносят по 100 мкл приготовленных в разведении 1:400 испытуемых проб сыворотки крови и инкубируют 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл в каждую лунку), каждый раз выдерживая лунки с буфером не менее 30 сек. При этом не рекомендуется оставлять лунки сухими в промежутках между промывками. Затем жидкость окончательно удаляют, микропанель подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.

Затем в лунки микропанели вносят по 100 мкл конъюгата и выдерживают 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации проводят процедуру промывания лунок.

Далее в исполь­зуемые лунки микропанели вносят по 100 мкл субстрата и выдерживают30 мин при температуре 20-30°С.

После чего реакцию останавливают, добавляя в каждую исполь­зуемую лунку по 100 мклстоп-раствора.

Сразу же после остановки реакции проводят измерение оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм и осуществляют оценку реакции с помощью компьютерной программы «ИФА-АВИВАК».

Условия и срок хранения

Срок годности компонентов набора — 12 месяцев от даты изготовления при хранении их в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С.

Набор для выявления антител к вирусуреовирусу птиц (РВП) методом иммуноферментным анализом (ИФА)

Общие сведения

В состав набора входят иммуноспецифические и химические компоненты:

— полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированными в лунках инактивированным антигеном: РВП — по 2 микропанели;

— буфер для разведения испытуемых и контрольных проб;

— промывочный буфер;

— стандарт — (сыворотка крови кур с повышенным содержанием специфических антител к антигену РВП);

— положительный контроль (сыворотка крови кур, содержащая специфические антитела к антигену РВП);

— отрицательный контроль (сыворотка крови кур, не содержащая специфических антител к антигену РВП);

— антивидовой конъюгат (антитела к IgG кур, меченые щелочной фосфатазой);

— субстрат;

— стоп-раствор.

Набор рассчитан на анализ 88 испытуемых проб на каждой микропанели. Компоновка набора допускает возможность дробного исполь­зования компонентов для проведения нескольких исследований по мере поступления биологического материала.

Для исследования исполь­зуют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза и бактериальной контаминации объемом 0,3–0,5 см³.

Следует помнить, что ИФА является высоко­чувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с подготовкой образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Перед началом работы микропанели и все компоненты набора выдерживают 20–30 мин при температуре 22-27°С. Не исполь­зованные реагенты убирают в холодильник (2 — 8°С) сразу же после проведения исследования.

Принцип метода

Вирусный антиген, адсорбированный в лунках полистироловой микропанели, связывается со специфическими антителами, присутствующими в сыворотке крови, в результате чего формируется комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (антитела к IgGкур, меченые щелочной фосфатазой), фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат- индикаторного раствора и образование растворимого окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски раствора в лунке микропанели пропорциональна содержанию антител в исследуемом материале.

Порядок применения

Приготовление рабочих растворов

Буфер для разведения проб. Концентрированный раствор буфера разводят в 4 раза дистиллированной или деионизованной водой.

Промывочный буфер. Концентрированный раствор буфера разводят в 20 раз дистиллированной или деионизованной водой.

Коньюгат, субстратный раствор и стоп-раствор — готовы к употреблению.

Подготовка испытуемых сывороток и контрольных проб

Все испытуемые сыворотки, стандарт, положительный и отрицательный контроли разводят в соотношении 1:400 буфером для разведения проб, исполь­зуя для каждого образца новый наконечник.

Постановка реакции

В лунки микропанели в двух повторах вносят по 100 мкл приготовленных контрольных проб: буфер для разведения проб, отрицательный контроль, положительный контроль, стандарт.

В остальные лунки микропанели вносят по 100 мкл приготовленных в разведении 1:400 испытуемых проб сыворотки крови и инкубируют 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл в каждую лунку), каждый раз выдерживая лунки с буфером не менее 30 сек. При этом не рекомендуется оставлять лунки сухими в промежутках между промывками. Затем жидкость окончательно удаляют, микропанель подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.

Затем в лунки микропанели вносят по 100 мкл конъюгата и выдерживают 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации проводят процедуру промывания лунок.

Далее в исполь­зуемые лунки микропанели вносят по 100 мкл субстрата и выдерживают30 мин при температуре 20-30°С.

После чего реакцию останавливают, добавляя в каждую исполь­зуемую лунку по 100 мклстоп-раствора.

Сразу же после остановки реакции проводят измерение оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм и осуществляют оценку реакции с помощью компьютерной программы «ИФА-АВИВАК».

Условия и срок хранения

Срок годности компонентов набора — 12 месяцев от даты изготовления при хранении их в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С.